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三种不同来源的仙茅根中总多糖含量差异性的研究
张棋，深圳凯吉星农产品检测认证有限公司，四川成都，610000
摘要 目的：利用硫酸－蒽酮法对野生、栽培和市售仙茅（Curculigo orchioides gaertn）根中总多糖含量差异性进行研究。结果表明宜宾野生仙茅、栽培仙茅和市售仙茅中总多糖含量分别为10.15%、2.81%、3.22％。结论：野生仙茅总多糖含量最高，与栽培仙茅和市售仙茅中总多糖含量均差异显著，栽培仙茅和市售仙茅差异不显著。为科学合理地保护和开发利用野生仙茅资源提供实验依据。
关键词：仙茅；多糖；含量测定；差异性
Abstract：This research is based on the study of the differences in the total polysaccharide among wild, cultural and marketed Curculigo orchioides Gaertn. The content was determined by the method of anthrone-sulfuric acid. Through experiment , the contents of the total polysaccharide in wild, cultural and marketed samples were 10.11%, 2.81% and 3.22％, respectively. The highest content of the total polysaccharide was founded in the wild material which shown significant differences comparing cultural and marketed samples. There were no differences between cultural and marketed material. These results provid an experimental evidence for protecting and exploiting wild Curculigo orchioides Gaertn scientifically and rationally.
Key words：Curculigo orchioides Gaertn; polysaccharides; content determination; differences
1 选题背景
仙茅（Curculigo orchioides Gaertn）是石蒜科仙茅属植物仙茅的干燥根茎，仙茅性温，味苦，有小毒，具有温肾壮阳、祛寒除湿、益经血之功效，常用于肾阳不足、阳痿精冷、腰膝冷痛、等临床病症[1]，是目前临床上几种最重要、最常用的补肾壮阳中药（附子、肉桂、淫羊藿、仙茅等）之一。研究表明，仙茅粗多糖具有抗缺氧、抗高温、镇静、抗惊厥、抗炎、抗骨质疏松、增强免疫功能、抗衰老、促进乳腺发育[2]、延缓生殖系统老化[3]、雄激素样作用等药理作用。以前人们常常以野生仙茅入药，随着仙茅药理活性的深入研究，仙茅的市场需求量逐渐增加，目前野生仙茅被大量采挖而引起资源短缺，在四川的仙茅主产区宜宾，原来曾是优势种群的野生仙茅，现已极为少见。为保护野生仙茅资源和满足市场需求，人们开始对仙茅进行人工栽培[4]，增加了仙茅的产量和生产速度。
2 材料与方法
2.1 药材
野生仙茅：2018年6月22日采自宜宾市明威乡山林
栽培仙茅：2018年6月22日采自宜宾市明威乡仙茅种植基地
市售仙茅：2018年6月13日购自四川正源药业有限公司
2.2 仪器
表2-1主要仪器设备
|
仪器名称 |
仪器编号 |
生产厂家 |
|
紫外分光光度计 |
20060515 |
北京谱析通用仪器有限公司 |
|
旋转蒸发器 |
RE-52AA |
上海亚荣生化仪器厂 |
|
真空干燥箱 |
CS1012 |
金坛市正基仪器有限公司 |
|
数显恒温水浴锅 |
HH4 |
金坛市正基仪器有限公司 |
|
电子天平 |
AR2130 |
OhausCorp.PineBrook,NJ,USA |
|
高速离心机 |
TCL-16C |
上海安亭科学仪器厂 |
2.3 药品与试剂
葡萄糖标准品、蒸馏水、95％乙醇（分析纯）、蒽酮（分析纯）、98%浓硫酸（分析纯）
3 实验部分
3.1 材料预处理
将三种不同来源的仙茅根洗净，晒干，粉碎成细粉过筛得80-100目的仙茅粉。
3.2 仙茅多糖的提取
取80-100目的仙茅粉末，加40倍水浸泡15 min，80℃水浴加热提取170 min，过滤，滤液（约80℃）减压浓缩至约100 ml，用95％乙醇调含醇量为80％，静置过夜，4000 r/min离心过滤，取沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤，常温真空干燥得仙茅粗多糖，计算粗多糖得率。
3.3 葡萄糖对照品溶液的制备
将葡萄糖于105℃干燥至恒重，精密称100.0 mg，置100 mL量瓶中，加蒸馏水溶解，定容至刻度，摇匀即得葡萄糖标准溶液（1.0 mg/mL葡萄糖）。
3.4 供试溶液的制备
精密称取仙茅粗多糖0.2 g，加50 mL蒸馏水溶解，过滤，滤液转至100 mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀即得。
3.5 检测波长的选择
将葡萄糖对照品溶液和供试溶液分别在紫外分光光度计上于400～800nm范围扫描，结果见图3-1和图3-2。由图可以看出，对照品溶液的波峰个数比样品溶液的波峰个数少；对照品溶液和样品溶液的最大吸收波长相近，分别为625.8nm和626.4 nm，选择626nm为测定波长。
图3-1 供试品最大吸收波长扫描曲线 图3-2标准品最大吸收波长扫描曲线
3.6样品含量测定
用水提醇沉法对市售、栽培、野生三种仙茅粉末（各50 g）中粗多糖进行提取，得粗多糖重量分别为3.78 g、2.54 g、6.13 g。再用蒽酮-硫酸法测定提取的市售、栽培、野生三种仙茅粗多糖的吸光度，利用回归方程计算总多糖的重量，从而对三种样品中所含总多糖的含量进行计算。结果见表3-4，由表可知野生仙茅中总多糖含量最高，其平均值为10.10%，栽培仙茅中总多糖含量最低，其平均值为2.81%。相对标准偏差分别为7.10%、10.15%、6.15%。
表3-4三种仙茅总多糖含量测定结果
|
样品 |
浓度 ug/mL |
粗多糖净重g |
粗多糖含量％ |
总多糖 重量g |
总多糖 含量％ |
相对标准 偏差（RSD） |
|
市售 |
20 |
3.78 |
7.56 |
1.57 |
3.14 |
7.10％ |
|
20 |
1.47 |
2.94 |
||||
|
栽培 |
20 |
2.543 |
5.08 |
1.36 |
2.72 |
10.15％ |
|
20 |
1.4 |
2.8 |
||||
|
野生 |
20 |
6.13 |
12.25 |
5.35 |
10.7 |
6.15％ |
|
20 |
4.9 |
9.8 |
3.7 差异性分析
对表3-4中三种仙茅总多糖含量进行差异性分析，结果见表3-5，由表可知，在α＝0.05和α＝0.01时，野生仙茅中总多糖的含量与栽培和市售仙茅中总多糖的含量有显著差异，而市售和栽培的仙茅中总多糖的含量没有显著差别。
表3-5总多糖含量差异性分析结果
|
样品 |
粗多糖净重g |
粗多糖含量％ |
总多糖重量g |
总多糖含量％ |
|
|
Meam＋SE |
95%置信区间 |
||||
|
|
3.78 |
7.56 |
1.61 |
3.22±0.114a |
2.856-3.584 |
|
栽培 |
2.54 |
1.27 |
1.40 |
2.81±0.143a |
2.356-3.264 |
|
野生 |
6.13 |
12.26 |
5.05 |
10.11±0.311b |
9.115-11.095 |
注：右上角标有不同小写字母的数据之间差异显著（P＜0.05，P＜0.01）
4 结论
通过对三种不同来源的仙茅根中总多糖含量差异性的研究，结果表明产于四川宜宾明威的野生仙茅其根中总多糖的含量最高，其值为10.11%，栽培仙茅其根中总多糖的含量最低，其值为2.81%。并且野生与市售、栽培的仙茅其总多糖的含量有显著差别，而市售和栽培仙茅中总多糖含量差异不明显。为科学合理地保护和开发利用野生仙茅资源提供了实验依据。
参考文献（References）
［1］李隆云．仙茅种质资源与质量研究［D］．成都中医药大学，2005．
［2］李培英，欧阳惠卿．补肾活血中药对乳腺萎缩，增生雌性大鼠乳腺形态的影响［J］．中国中西医杂志，2001，21(6)：448．
［3］崔凤起等．仙茅合剂对大鼠生殖系统老化的影响［J］，佳木斯医学院学报，1994，17(3)：4．
［4］彭锐，李泉森，钟国跃等．仙茅主要农艺性状相关性分析［J］．重庆中草药研究．2002，46（2）：16-18．
